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小鼠原代肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的三種提取方法

更新時間:2023-02-17  |  點擊率:911
    肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(L iver Sinusoidal Endothelial Cells)屬于肝臟中的非實質(zhì)性細(xì)胞,在肝臟中起到屏障、物質(zhì)代謝、超濾內(nèi)吞,抗原呈遞等作用。近年來國內(nèi)外學(xué)者對肝竇內(nèi)皮細(xì)胞分離方法進(jìn)行了大量的研究,但要獲得純度高,細(xì)胞活性好,功能穩(wěn)定的肝竇內(nèi)皮細(xì)胞仍很困難,尤其是小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞。由于小鼠品系豐富可以更充分的滿足各類研究的需要,所以獲得細(xì)胞活性好的小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞具有重要意義。
  目前,小鼠原代肝竇內(nèi)皮細(xì)胞采用以下三種提取方法:兩步原位灌流結(jié)合密度梯度離心法、機(jī)械分離結(jié)合酶消化及密度離心法、免疫磁珠分選及流式分選法。兩步原位灌流結(jié)合密度梯度離心法主要集中于大鼠,由于技術(shù)條件的限制,較少應(yīng)用于小鼠的肝竇內(nèi)皮細(xì)胞分離,且該方法無法將肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和枯否細(xì)胞(kupffer cells)分離,導(dǎo)致最終獲得的細(xì)胞純度受到影響;機(jī)械分離結(jié)合酶消化及密度離心法對細(xì)胞損傷過大,且會造成組織塊表面消化過度,內(nèi)部消化不足;免疫磁珠分選及流式分選法所得到的小鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞雖然純度高,但是由于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞缺乏特異性的表面標(biāo)志物,使得細(xì)胞獲得量少,且細(xì)胞分選前必須加上某些化學(xué)標(biāo)記有可能造成細(xì)胞的分化或凋亡,同時其昂貴的儀器及試劑費用限制了在賂個實驗室的應(yīng)用。